子宫腺肌症是一种常见的妇科疾病,其发病机制复杂且尚不完全清楚。近年来的研究表明,PTEN基因在多种肿瘤及疾病中发挥着关键调控作用。通过构建携带PTEN-shRNA的慢病毒载体并将其成功转染至人子宫腺肌症细胞系,可有效敲低目标基因表达,为研究该疾病的分子机制提供重要工具。
本研究首先设计了针对PTEN特异性序列的shRNA,并将其插入到慢病毒表达载体中。经过酶切验证和测序确认后,利用包装体系将重组质粒转入293T细胞以生产高滴度的慢病毒颗粒。随后,采用不同MOI值感染人子宫腺肌症细胞,并通过嘌呤霉素筛选获得稳定的转基因细胞克隆。最终通过qRT-PCR和Western blot技术检测发现,与对照组相比,实验组细胞内PTEN mRNA水平显著下降(P<0.01),蛋白表达亦呈现明显降低趋势。
此稳定细胞模型的成功建立不仅有助于深入探讨PTEN基因在子宫腺肌症发生发展过程中的具体功能,还为开发相关治疗策略奠定了坚实基础。未来工作将进一步探索基于该模型的药物筛选平台建设及其临床转化潜力评估。